罗光荣　丁建中 中华实验和临床病毒学杂志 1999年第2期第13卷 论著摘要

1996年6～9月，在湖北省荆州市城区及近郊儿童中有一批以发烧、咽红、咳嗽为主要症状的病儿，疑为呼吸道病毒感染。我们采集标本。方法是5岁以上儿童采样前先咳嗽数次，然后将采样液(pH7.4肉汤)倒入口内，仰头让液体在咽喉部反复含漱约1分钟，吐回试管；5岁以下儿童用2支棉拭子于咽壁周围及扁桃体蘸取粘液，放入采样管内，立即送试验室。将咽漱液充分振摇，碎渣多者低速离心沉淀，取上清液加双抗(每毫升含青、链霉素各200U)，置4℃冰箱4小时。取新鲜人胚肾组织，用0.25%胰酶冷消化，分装培养使成单层后，弃去营养液，每管接种标本0.2 ml，每份标本接种3～4个细胞管，置37℃温箱1小时，然后弃去标本液加维持液，每天观察细胞病变，一般观察15天，未见细胞病变者将细胞管冻溶数次，进行盲目传代。用深圳晶美生物工程有限公司提供的试剂盒检测血清特异性IgM抗体。

结果46份标本经原代人胚肾组织培养，有7份发生细胞病变，细胞病变的特点是，细胞明显肿大，颗粒增生，细胞逐渐变圆聚集成葡萄状，最后自管壁脱落。对7份细胞病变典型的病毒管，作补体结合试验，有3份标本阳性，滴度1∶4，1∶4与1∶8。以中国科学院病毒研究所提供的3、7、11型腺病毒血清作中和试验(血清1∶2稀释)，除3型腺病毒血清为阳性外余为阴性。将3型腺病毒血清作倍比稀释，上述7份标本均能被1∶5，1∶10稀释血清中和。同条件操作病毒对照管“++++”，正常细胞管阴性。结果，7例分出原病毒的患儿，有3例采集了急性期血清，取其血清作倍比稀释，每管0.2 ml，加入等量病毒液，37℃作用1小时，每管接种0.15 ml，当病毒对照出现“++++”，而细胞对照和血清对照均为“-”。以不出现病变或只有“±”病变最高血清稀释度，算作血清中和滴度，3份标本的中和抗体滴度分别为1∶8，1∶8与1∶16。经-20℃冻存3例急性期患儿血清标本，以ELISA法作腺病毒特异性IgM测定(复核)，3份血清均为IgM阳性。